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荧光标记rBC2LCN(AiLecS1)

2514694138412242.jpg未分化人ES/iPS细胞检测试剂

仅需添加培养液便可检出人ES/iPS细胞!

荧光标记rBC2LCN(AiLecS1)


◆rBC2LCN(AiLecS1)


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  rBC2LCN(AiLecS1)是在伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cenocepacia)来源凝集素BC2L-C的N末端域表达的重组凝集素。

  由于rBC2LCN对存在于人ES/iPS细胞表面的足糖萼蛋白(Podocalyxin)上的粘蛋白样O-型糖链的H型3(Fucα1-2Galβ1-3GalNAc)具有高亲和力,因此可用作人ES/iPS细胞的未分化标志物。

  本亚博直播下载是荧光染色标记,能直接添加到人ES/iPS细胞的培养液中,实现未分化活细胞分析。 适用于未分化细胞检测用标记。可用于细胞染色,流式细胞仪。另外,使用本品持续培养数日已确认细胞无毒性。

  我们供应绿色荧光标记(FITC),黄色荧光标记(Cy3),红色荧光标记(Cy5)的三种类型的系列商品。



◆特点


● 添加到培养基即可进行染色

● 无需固定细胞,活细胞也可直接进行明显染色

● 细胞毒性低,染色后也可培养

● 识别Tra-1-60, Tra-1-81, SSEA-3, SSEA-4细胞表面存在的糖链

● 可用于细胞染色和流式细胞仪



亚博直播下载概述


● 已进行无菌试验(0.1μm过滤器进行灭菌)

● PBS(-)溶液

● 使用时稀释比

   Live Cell Imaging 1:100~1,000
   Flow Cytometry 1:100~1,000

● 激发波长/发射波长



Excitation

Emission

rBC2LCN-FITC

495nm

520nm

rBC2LCN-547

551nm

565nm

rBC2LCN-635

634nm

654nm



◆使用方法


细胞染色

活细胞染色(Live Cell Imaging)

1. 准备培养中的人ES/iPS细胞

2. 每1mL的培养基添加1~10μL的荧光标记rBC2LCN

3. 37℃,5%CO2孵育30分钟。

4. 更换新的培养基或者HBSS(+)。

5. 利用荧光显微镜观察


固定细胞染色

1. 准备培养中的人ES/iPS细胞

2. 除去培养基,用HBSS(+)洗净。

3. 添加4%多聚甲醛(PFA)溶液,室温静置10~20分钟。

4. 除去PFA后,用D-PBS(-)洗净三次。

5. 添加D-PBS(-)。

6. 每1mL的D-PBS(-)添加1~10μL荧光标记rBC2LCN。

7. 37℃,5% CO2孵育30分钟。

8. 更换D-PBS(-)。

9. 利用荧光显微镜观察。


流式细胞仪

1. 准备培养中的人ES/iPS细胞。

2. 使用细胞分散液,分散成单细胞。

3. 将细胞分散液移至管内,1,000rpm离心3分钟。

4. 除去上清液,用FCM Buffer*重悬细胞,离心后,舍弃上清液。

* FCM Buffer: D-PBS(-)和HBSS(-)含有10mmol/L EDTA,1% BSA

5. 用FCM Buffer重悬出5×10cells/mL的细胞悬浮液

6. 每1mL细胞悬浮液,添加1~10μL的荧光标记rBC2LCN。

7. 室温,避光静置30分钟。

8. 1,000rpm离心三分钟,除去上清液。

9. 用FCM Buffer重悬细胞,离心后,除去上清液。

10.  适量的FCM Buffer再悬浮细胞。

11.  进行流式细胞术。


使用注意

1. rBC2LCN染色可以维持2~3天。

2. 使用含有血清的培养基可能使信号背景变高

3. 根据流式细胞仪进行细胞分选时,当细胞分散或FCM缓冲液的终浓度到达10μmol/L时,请添加Y-27632。



◆人iPS细胞的活细胞染色(Live Cell Imaging)


● 用rBC2LCN-FITC, rBC2LCN-635以及Hoechst33342对人iPS细胞201B7株进行染色处理。(无细胞固定)


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(稀释倍数 1:1,000)


● 用rBC2LCN-FITC,Tra-1-60,Tra-1-81,SSEA-4,对人iPS细胞201B7株进行染色处理。

   2小时后确认染色图像。(未固定细胞)


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(稀释倍数 1:100)       

★ 与Tra-1-60, Tra-1-81相比较, rBC2LCN的活细胞染色度更强。

★ 即使交换培养基,rBC2LCN染色第二天后染色效果依然明显。



◆人ES细胞的活细胞染色(Live Cell Imaging)


  使用rBC2LCN-FITC对人ES细胞WA01株进行染色(未细胞固定)。细胞的一部分无法维持未分化状态而进行分化。如果使用rBC2LCN-FITC对活细胞进行染色,以维持未分化状态部分已染色,而已分化部分未染色来进行区分。


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<数据提供 国家研究与发展公司先进工业科学和技术研究院 新药开发的基础研究部门恭子小沼老师,伊藤弦老师>



◆人iPS细胞固定后染色


  将人iPS细胞201B7株用多聚甲醛固定后,使用rBC2LCN和DAPI进行细胞染色。


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对于人iPS细胞毒性评估

  向人iPS细胞201B7株的培养液中分别添加其1/1,000、1/100、1/50量的rBC2LCN-FITC,持续培养。其结果是,不存在rBC2LCN-FITC浓度对毒性影响,不同浓度的细胞增殖程度相同程度。


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〔细胞株〕
 人iPS细胞201B7株

〔培养基组成〕
 StemSure® hPSC培养基Δ+35ng/mL bFGF

〔涂层〕
 Matrigel® hESC-Qualified Matrix

〔细胞接种数目〕
 4×104cells/well(12孔板)

 使用Flow Cytometry进行人iPS细胞分离

 使用rBC2LCN-FITC及rBC2LCN-6547、rBC2LCN-635对人iPS细胞201B7细胞株和人正常二倍体成纤维细胞染色,进行流式细胞术。

 实验结果:未分化的人iPS细胞与分化的人二倍体成纤维细胞成功分离。

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亚博直播下载列表


亚博直播下载编号

亚博直播下载名称

等级

容 量

180-02991
186-02993

人iPS未分化标记染料rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC)

rBC2LCN-FITC 【AiLecS1-FITC】
    Ex. 495nm, Em. 520nm

用于细胞染色

100μL
  100μL×5

186-03211
182-03213

 人iPS未分化标记染料rBC2LCN-547   (AiLecS1-547)

rBC2LCN-547 【AiLecS1-547】
    Ex. 551nm, Em. 565nm

用于细胞染色

100μL
  100μL×5

185-03161
181-03163

人iPS未分化标记染料rBC2LCN-635   (AiLecS1-635) 

rBC2LCN-635 【AiLecS1-635】
    Ex. 634nm, Em. 654nm

用于细胞染色

100μL
  100μL×5



◆相关亚博直播下载


★rBC2LCN剥离液★

本亚博直播下载能够将结合在人ES细胞▪ 人iPS细胞表面糖链的rBC2LCN凝集素从细胞里面剥离出来。剥离rBC2LCN之后的细胞能够进行抗体染色,可以继续培养。


亚博直播下载编号亚博直播下载名称等级规格
182-03171

rBC2LCN剥离溶液

rBC2LCN Stripping Solution

【AiWashS1】

用于细胞培养10mL


★BC2LCN凝聚素, 重组体、溶液未标识rBC2LCN系列


亚博直播下载编号

亚博直播下载名称

等级

规格

029-18061
025-18063

BC2LCN (AiLecS1)凝集素 

BC2LCN 【AiLecS1】 Lectin, recombinant, Solution

糖链研究用

1mg
1mg×5



★StemSure® hPSC培养基Δ无饲养层细胞条件下可用于维持培养人多功能干细胞(ES/iPS细胞)的无血清液态培养基。原料不含动物体来源成分。


亚博直播下载编号

亚博直播下载名称

等级

规格

197-17571
193-17573

StemSure人多能干细胞培养基

StemSure® hPSC Medium Δ

用于细胞培养

100mL
  100mL×4

064-05381
068-05384
060-05383

成纤维细胞生长因子(碱性),人,重组,无动物衍生物

Fibloblast Growth Factor (basic), Human, recpmbonant,   Animalderived-free 【bFGF/FGF2】

細胞生物学用

50μg
  100μg
  1mg

160-27051

hPSC解离溶液

hPSC Dissociation Solution

 人类iPS細胞用单体细胞分散剂。

用于细胞培养

100mL


★StemSure® 系列
   已通过小鼠ES细胞D3株品质测验。


亚博直播下载编号

亚博直播下载名称

等级

规格

197-16275

StemSure D-MEM(高糖)含酚红和丙酮酸钠

StemSure® D-MEM with   Phenol Red and Sodium Pyruvate

用于细胞培养

500mL

198-15781

StemSure10 mmol/L 2-巯基乙醇

StemSure® 10mmol/L   2-Mercaptoethanol Solution(×100)

用于细胞培养

100mL

195-15791

StemSure50 mmol/L 硫代甘油(×100)

StemSure® 50mmol/L   Monothioglycerol Solution(×100)
  可与2ME同等使用的还原剂。医药用外不适用。

用于细胞培养

100mL

190-15805

StemSure 0.1w/v%明胶溶液

StemSure® 0.1w/v%   Gelatin Solution

用于细胞培养

500mL

195-16031

StemSure干细胞冻存液

StemSure® Freezing Medium

含有BSA的ES细胞・iPS细胞冻存液

用于细胞培养

100mL

197-17831

StemSure® 人多能细胞冻存液

StemSure® hPSC Freezing Medium, AF

无动物体成分的ES·iPS细胞冻存液

用于细胞培养

100mL

199-16051
195-16053

StemSure® 白细胞抑制因子溶液,小鼠,重组

StemSure® LIF, Mouse,   recombinant, Solution 

用于细胞培养

106units
  106units×10


● ES・iPS细胞研究用试剂
  2007年iPS细胞确立发表后,许多与iPS细胞相关的文献纷纷发表。在各种各样的文献中报道出来的与ES细胞・iPS细胞の未分化能维持和分化诱导相关的低分子化合物也逐渐阵容化。

● 液态培养基・细胞培养用试剂
  我们有着以液态培养基为首的平衡盐溶液、细胞剥离·分散液、抗生物质溶液、细胞外基质等丰富的亚博直播下载种类。



参考文献

·   Onuma, Y., et al.: Biochem. Biophys. Res. Commun., 431, 524, (2013).

·   Tateno, H., et al.: Stem Cells Transl. Med., 2, 265, (2013).

·   Tateno, H., et al.: Sci. Rep., 4, 4069, (2014).


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